干細胞是一類具有無限的或者永生的自我更新能力的細胞、能夠產(chǎn)生至少一種類型的、高度分化的子代細胞 [1]。干細胞被認為可以提供一種理想的生物學平臺, 用于多方面的科學研究與臨床應用, 如藥物篩選平臺的建立、細胞發(fā)育與分化的分子調(diào)節(jié)機制研究、基因靶向敲除動物模型的構建、組織工程種子細胞及基因治療載體的建立、細胞治療及再生醫(yī)學等 [2]。

干細胞研究離不開干細胞的培養(yǎng)。合格的干細胞培養(yǎng)的過程，包括促進其分裂增殖和維持其未分化狀態(tài)。基于以上兩點要求，目前主流的標準培養(yǎng)方法為飼養(yǎng)層培養(yǎng)法：即在有絲分裂失活的飼養(yǎng)層細胞 (FEEDER) 上培養(yǎng)干細胞。培養(yǎng)體系一般為高糖 DMEM，添加適量的胎牛血清 (FBS) 及白血病抑制因子 (LIF)、L-谷氨酰胺等添加劑。另外，為了避免外源性物質(zhì)的干擾（如血清、病原等成分）[3]，又嘗試及建立了其他培養(yǎng)基, 包括條件培養(yǎng)基 (CM) 、無飼養(yǎng)層、無血清、血清替代物 (SR) 非條件培養(yǎng)基等。其中無血清培養(yǎng)基中添加了更多珍貴的細胞因子，而血清替代物培養(yǎng)基則采用人工/半人工合成分子替代物的形式，來替代血清，成本相較于普通胎牛血清*培養(yǎng)基而言，高出不少。

一、飼養(yǎng)層培養(yǎng)法

目前認為，飼養(yǎng)層能夠提供的干細胞接觸所必須的復雜蛋白分子。自 1981 年 EVANS 等人 [4] 用飼養(yǎng)層成功培養(yǎng)了 mESC 起，飼養(yǎng)層培養(yǎng)法便開始不斷發(fā)展。實驗過程，主要分為以下三步：準備飼養(yǎng)層細胞、飼養(yǎng)單層制備、接種干細胞培養(yǎng)。

飼養(yǎng)層培養(yǎng)法卻存在著不可避免的缺點：

• 1、飼養(yǎng)層細胞生命期有限，不能在體外長期傳代。在體外傳代時間太長，其產(chǎn)生促增殖因子和抑制分化因子的能力會減弱甚至喪失。

• 2、MEF 細胞的染色體干擾：飼養(yǎng)層細胞會影響干細胞遺傳物質(zhì)。 /3、絲裂mei素-C 的影響：飼養(yǎng)層細胞需要用到絲裂mei素-C，該物質(zhì)可能會影響干細胞的增殖。

• 3、異種抗原及污染的影響：飼養(yǎng)層細胞作為異種抗原也會影響干細胞的健康，還有發(fā)生細胞間融、引入其他動物源性病原體，給臨床移植治療帶來風險。

• 4、所用試劑復雜，批次不可控：所用材料的批次之間的波動，限制了培養(yǎng)物之間的可重復性。

• 5、實驗周期長，培養(yǎng)基配制復雜：現(xiàn)在市場上有多種多樣的干細胞培養(yǎng)基可供選擇，大多數(shù)都是在基礎培養(yǎng)基的基礎上，添加例如白血病抑制因子（LIF）[6] 這樣的多功能細胞因子，但無論進口還是國產(chǎn)的產(chǎn)品，都不免有價格高昂的缺點。而自己配制，又會面臨操作繁瑣、易污染等問題。而且飼養(yǎng)層培養(yǎng)發(fā)從培養(yǎng)飼養(yǎng)細胞開始，至少需要一周時間才能得到所需的干細胞，周期過長。

二、無飼養(yǎng)層培養(yǎng)

無飼養(yǎng)層培養(yǎng)類似普通細胞培養(yǎng)，主要分為以下幾個步驟：培養(yǎng)瓶預處理、配制培養(yǎng)基、消化干細胞、接種、培養(yǎng)。

相較于飼養(yǎng)層培養(yǎng)法，無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法的優(yōu)點顯而易見：更加簡便、節(jié)省時間；但缺點也十分明顯：

• 1、培養(yǎng)的細胞質(zhì)量不穩(wěn)定：由于自行配制的培養(yǎng)基，不可控因素較多，缺少營養(yǎng)細胞對的存在，干細胞生長狀況也不穩(wěn)定，直接影響實驗結果。

• 2、成本高昂：商品化的培養(yǎng)基，根據(jù)品質(zhì)不同，價格也是從幾百元到幾千元不等，直接增加了干細胞的培養(yǎng)成本。

• 3、需要不斷對培養(yǎng)基進行調(diào)整，對實驗人員有很高的要求：無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法需要人為添加各種各樣的細胞因子，不同的干細胞還需要進行細微的調(diào)整以適應不同的生長需求，因此培養(yǎng)難度更高，對技術人員的操作水平及經(jīng)驗有很高的要求

三、干細胞*培養(yǎng)基培養(yǎng)法

我們都知道，一直以來，干細胞的培養(yǎng)方法被飼養(yǎng)層培養(yǎng)法和無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法所「統(tǒng)治「，近日，一項新技術——干細胞*培養(yǎng)基培養(yǎng)法問世！這項重大突破，兼顧了上述兩種培養(yǎng)法的優(yōu)點又巧妙規(guī)避了它們的致命缺點，大大降低了干細胞培養(yǎng)的技術門檻！

干細胞*培養(yǎng)基是一種真正意義上的全新干細胞培養(yǎng)技術！在含微量胎牛血清的基礎培養(yǎng)基中，通過添加一種人永生化干細胞系的條件培養(yǎng)基混合組成。干細胞*培養(yǎng)基含有多種促進細胞增殖的生長因子，如表皮生長因子（EGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）、神經(jīng)細胞生長因子（NGF）、肝細胞生長因子（HGF）、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）、血小板衍生生長因子（PDGF）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）及干細胞分化抑制因子等。因此，干細胞*培養(yǎng)基具有促進干細胞增殖、抑制干細胞分化及維持干細胞表型，增加干細胞的傳代次數(shù)的作用，可廣泛應用于人及動物的胚胎干細胞、間充質(zhì)干細胞及各種組織來源的成體干細胞的培養(yǎng)。

由于人永生化干細胞系的使用，使得干細胞*培養(yǎng)基無需額外添加細胞因子或其他人工合成促生長成分，因此，相較于其他商品化的干細胞培養(yǎng)基、干細胞培養(yǎng) Kit、無血清培養(yǎng)基、血清替代物 (SR) 非條件培養(yǎng)基等產(chǎn)品，用干細胞*培養(yǎng)基進行實驗，成本相對更低，但效果卻是更上一層樓。

縱觀整個干細胞培養(yǎng)基市場，能同時滿足以上幾個條件的產(chǎn)品可以說是鳳毛麟角。而 Ausbian 干細胞*培養(yǎng)基則是其中的優(yōu)秀代表，讓實驗者可以輕松上手，各種干細胞培養(yǎng)都變得小菜一碟！

首先，Ausbian 干細胞*培養(yǎng)基擁有與眾不同的技術，使得培養(yǎng)基本身就含有豐富的細胞因子，其中包含了所有含有促進干細胞生長和抑制干細胞分化的各種因子，因此能夠有效維持干細胞的干性，抑制干細胞的分化。

其次，無需額外添加和二次配制，更省去了體現(xiàn)制備飼養(yǎng)層的復雜操作，根據(jù)細胞生長情況每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基。這在無形之中減少了細胞培養(yǎng)的實驗步驟，熟悉細胞實驗的小伙伴應該都知道，實驗步驟越簡潔，不可控因素也就越少，實驗出錯的概率也會更低，因此，使用干細胞*培養(yǎng)，使實驗更簡單，可以大大縮短時間成本；培養(yǎng)的干細胞品質(zhì)更穩(wěn)定，對實驗人員技術要求也更低，節(jié)省人力成本，輕輕松松讓干細胞茁壯成長。

不僅如此，因為少了飼養(yǎng)細胞的干擾，也沒有絲裂mei素-C 等物質(zhì)的添加，所以用 Ausbian 干細胞*培養(yǎng)基能夠收獲純度更高、遺傳物質(zhì)更穩(wěn)定的干細胞。

在培養(yǎng)細胞有效性方面，許多科研人員對其進行了評估：培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞可以細胞傳代次數(shù) 8-10 次、培養(yǎng)成體干細胞可以使細胞的增殖速率增加 300%，實驗數(shù)據(jù)真實可靠。

1. 人成體干細胞（3 代）增殖實驗：CCK8 分析

2. 人間充質(zhì)干細胞（3 代）增殖實驗：CCK8 分析

3. 細胞傳代次數(shù)：

Ausbian 干細胞*培養(yǎng)基另外一項革命性的突破在于，可廣泛應用于人及動物的胚胎干細胞、間充質(zhì)干細胞及各種組織來源的成體干細胞的培養(yǎng)，省去了更換細胞時反復調(diào)試培養(yǎng)基的繁瑣步驟，很高的普適性進一步降低了人力、物力以及時間成本。

說完有效性再來看看安全性。Ausbian 干細胞*培養(yǎng)基均經(jīng)過嚴格的質(zhì)量檢驗，無論是支原體還是衣原體檢測均為陰性，無農(nóng)藥污染及重金屬超標，同時還進行了放射性照射，確保培養(yǎng)基無任何病原體及病毒污染，確保內(nèi)毒素極低，為干細胞提供一個安全健康的生長環(huán)境。

最后要說明的是，Ausbian 干細胞*培養(yǎng)基是我國的科學家自主研發(fā)的，其中制備的永生化人干細胞系為具有獨te性，制備產(chǎn)品所使用的永生化人干細胞系國內(nèi)同類產(chǎn)品，貨源充足，供貨穩(wěn)定，供貨周期短，保證干細胞生長過程中不會出現(xiàn)「斷糧」的情況，讓實驗者更安心！

參考文獻：

1. 裴雪濤．干細胞生物學：科學出版社，2003：4-15

2. 吳靜,胡東,張榮波.胚胎干細胞培養(yǎng)方法研究進展[J].廣東醫(yī)學,2010,31(01):116-118.

3. J.A. Burdick, G. Vunjak-Novakovic Engineered microenvironments for controlled stem cell differentiation Tissue Eng. Part A, 15 (2009), pp. 205-219

4. Evans MJ, Kaufman MH. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos. Nature. 1981 Jul 9;292(5819):154-6. doi: 10.1038/292154a0. PMID: 7242681.

5. 田小利，陳蘭英，扈萊良. 1994.　轉(zhuǎn)基因方法Ⅱ：胚胎干細胞法. 轉(zhuǎn)基因動物原理、技術與應用. 吉林科技出版社， 26～32

Williams RL, Hilton DJ, Pease S. 1988. Myeloid leukaemia inhibitory factor maintains the developmental potential of embryonic stem cells. Nature, 336: 684～687